小动物活体成像技术是一种应用影像学方法，对活体状态下的生物过程进行组织、细胞和分子水平的定性和定量研究。其步骤主要包括光学标记、构建动物模型和活体动物成像三部分，以下是对该技术的详细步骤说明：

一、光学标记

1.选择荧光素酶：根据实验需求选择合适的荧光素酶进行载体构建，建立稳转细胞系。

2.构建重组质粒：制备带有荧光素酶报告基因或编码荧光蛋白基因的真核表达质粒，并进行扩增纯化。

3.细胞转染：取对数生长期的目标细胞，将其接种于培养板内，待细胞融合度达到适宜比例后，进行转染。转染方法可以采用脂质体转染试剂或电转染等方式，将目标细胞、脂质体转染试剂及足量的质粒载体悬浮液共培养一段时间，之后补充新鲜的培养液。

4.筛选阳性克隆：转染后的细胞经过一段时间的培养，通过荧光素酶活性检测等方法筛选出阳性克隆。

二、构建动物模型

1.细胞培养：将筛选出的阳性克隆细胞进行培养，确保其处于对数生长期且活性良好。

2.接种细胞：根据实验目的选择尾静脉注射、皮下移植、原位移植等方法将已标记的细胞接种到实验动物体内。接种前需要对实验动物进行麻醉处理。

三、活体动物成像

1.麻醉动物：将实验动物放入麻醉系统中进行麻醉处理，以确保其在成像过程中保持静止状态。

2.放入成像暗箱：将麻醉后的实验动物放入成像暗箱平台中，并调整平台的高度和视野以确保成像效果。

3.拍摄背景图：在开启照明灯的情况下拍摄第一次背景图，以作为后续成像的参考。

4.生物发光成像：自动关闭照明灯，在没有外界光源的条件下拍摄由实验动物体内发出的光，即生物发光成像。与第一次的背景图叠加后可以清楚地显示动物体内光源的位置。

5.荧光成像：对于荧光成像，需要选择合适的激发和发射滤片，并在成像前向实验动物体内注射荧光素等底物以激发发光。

6.图像分析：利用专业软件进行图像分析过程，可以方便地选取感兴趣的区域进行测量和数据处理及保存工作。软件可以计算出此区域发出的光子数等实验数据。

此外，根据实验的具体需求，还可能需要进行其他步骤，如注射底物荧光素、选择合适的检测时间进行成像观察等。

总的来说，小动物活体成像技术是一种复杂而精细的实验方法，需要严格控制实验条件和操作步骤以确保成像效果和实验数据的准确性。