样本采集

通常从头皮等毛发丰富的部位通过微创手术采集健康的毛囊组织，尽量选取生长期的毛囊，以保证干细胞的活性和数量。

干细胞分离

酶消化法：使用如中性蛋白酶、胰酶 / EDTA 等对毛囊组织进行处理，将组织消化成单细胞悬液，以便分离出毛囊干细胞。

机械分离法：利用显微切割等方法直接从毛囊组织中分离出特定部位的干细胞，如毛囊外根鞘的隆突区。

培养体系建立

选择培养基：常用的有 DMEM/F12 培养基等，还可添加胎牛血清、生长因子、细胞因子等营养成分，以满足干细胞的生长和增殖需求。

准备饲养层细胞：如丝裂霉素处理的人成纤维细胞，可提供干细胞生长的微环境和支持。

细胞培养与扩增

将分离得到的毛囊干细胞接种到培养体系中，置于 37℃、5% CO₂的培养箱中培养。定期观察细胞的生长状态，根据细胞的增殖情况进行换液和传代，以扩增干细胞的数量。

类器官形成与培养

将扩增后的毛囊干细胞与特定的细胞外基质混合，如低浓度的细胞外基质，调整为核壳结构，以增强促进毛囊生长的机制，在体外培养形成毛囊类器官。

质量检测与鉴定

通过免疫荧光染色、PCR 等方法检测毛囊干细胞的标志物，如 CD200、K19 等，以鉴定干细胞的纯度和特性；还可对培养的类器官进行形态学观察、组织学分析等，评估其结构和功能是否正常。